超敏ECL化学发光液 Femto-Sensitive ECL Solution
Femto-Sensitive ECL Solution
SmartBuffers® 超敏化学发光液
Features 产品特点:
ü 超灵敏:含独特的发光增强剂,发光灵敏度超高。
ü 低背景 含精准的发光底物,提高信噪比,灵敏度更高背景却更低。
ü 信号强 有独特的发光配方,发光时间长达6小时以上,轻松进行曝光操作。
ü 稳定:含独特的发光稳定剂,室温下密封避光保存效期1年,2-8℃储存长达2年。
Description 产品描述:
SmartBuffers® Femto-Sensitive ECL Solution是一种基于Luminol的高灵敏性、非放射性化学发光底物,用于检测免疫印迹中固定在膜上的辣根过氧化物酶(HRP),最低可检测飞克级别的抗原。持续发光时间长达6个小时,可反复曝光于X射线胶片或化学发光成像系统,以获得最佳的结果或剥离的免疫检测试剂和再探测。
SmartBuffers® Femto-Sensitive ECL Solution可用于Western Blot,Northern Blot, Southern Blot, Dot Blot等实验中检测HRP标记的探针或者抗体。
Preparation使用说明:
1. 常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交,洗膜。
2. 洗涤膜上的 HRP 标记二抗时,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液Luminol/Enhancer solution 和 Stable Peroxide Buffer 1:1混合,放置使之升到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液(0.125ml发光工作液/cm膜)充分接触。室温孵育 3-5分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。
5. 在 X 光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹杂交膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内,最好蛋白带面向上。
6. 在黑暗中放入X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
Storage and stability 存储及效期:
室温(2-30℃)避光干燥密封保存及运输,有效期长达1年;冷藏2-8℃避光干燥密封保存,有效期长达2年。
注意事项:
1. 为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件,包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度以及杂交膜及封闭试剂的选择;
2. 由于牛奶中含有内源性生物素,在使用亲和素/生物素系统时,封闭液中请避免使用奶粉;
3. 在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20 (终浓度为0.05 % ),以减少非特异性结合;
4. 由于叠氮钠是HRP抑制剂,在缓冲液中避免使用叠氮钠作为防腐剂;
5. 整个免疫印迹实验过程请确保印迹膜始终处于湿润状态,避免干燥;
6. 为获得最佳实验效果,抗体孵育及膜洗涤步骤中请使用摇床辅助完成;
7. 在膜操作过程中请带手套操作或者使用干净的镊子,避免蛋白污染;
8. 实验过程中,请使用干净的器材。保证非金属设备没有明显划痕,金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景;
9. 避光条件下,配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定8小时。如暴露于阳光或其他强光下,工作液会受影响。为获得最佳效果,可于棕色瓶中配制工作液,避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用;
10. 蛋白过量或长时间曝光,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊;
11. 发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光;
12. 某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜,例如“克林莱”牌子保鲜膜。
Western Blot胶片曝光强度对比图 |
化学发光仪检测发光强度对比图 |
Product information 产品信息:
目录编号Article No.. |
产品名称 Product Name |
包装规格Pack Size |
对应体积Solution Vol. |
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ECL-0100 |
Femto-Sensitive ECL solution |
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50mL |
Luminol/Enhancer solution |
100 |
mL/Set |
超敏化学发光液 |
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50mL |
Stable Peroxide Buffer |
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ECL-1000 |
Femto-Sensitive ECL solution |
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500mL |
Luminol/Enhancer solution |
1000 |
mL/Set |
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超敏化学发光液 |
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500mL |
Stable Peroxide Buffer |
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Associated Products 相关产品
Product name 产品名称 |
Page No. 页码 |
PBS-Tween磷酸盐缓冲液含吐温20(PBST)速溶颗粒/片剂 |
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TBS-Tween Tris盐缓冲液含吐温20(TBST)速溶颗粒 |
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NC膜/PVDF膜 |
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TMB显色试剂盒 |
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快速转膜缓冲液 |
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Tris-Gly-SDS/Tris-Gly/Tris-MES/Tris-MOPS/Tris-HEPES缓冲液 |
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AnyKD 快速制胶试剂盒 |
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预染标准蛋白Marker |
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Q&A常见问题及解决方案:
Questions 问题 |
Cause可能原因 |
Solutions 解决方法 |
膜上出现棕色或黄色条带 |
HRP过多 |
稀释HRP-二抗至合适浓度 |
发光时间短 |
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整个膜片发光 |
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无信号或者信号弱 |
HRP过多造成荧光很多淬灭 |
稀释HRP-二抗至合适浓度 |
抗体特异性不好或者失效 |
更换抗体 |
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转膜失败 |
优化条件再次转膜,分子量小的蛋白质减少 转膜时间,并使用0.22μM的膜,分子量的蛋白质应当提高转膜时间 |
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目的蛋白质太少 |
增加样品上样量 |
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背景太高 |
HRP过多 |
稀释HRP-二抗至合适浓度 |
封闭不彻底 |
更换封闭液,增加封闭时间 |
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洗膜不彻底 |
增加洗膜次数,时间,加大洗涤液的用量 |
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抗原太多 |
减少SDS-PAGE上样量 |
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一抗使用量太多 |
稀释一抗使用量至合适浓度 |
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一抗特异性太低 |
更换抗体 |
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条带有斑点 |
转膜不彻底 |
优化条件再次转膜 |
PVDF膜未充分湿润 |
PVDF膜首先用甲醇充分湿润后在水化处理 |
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膜和保鲜膜之间有气泡 |
曝光时赶除气泡 |
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胶片上有斑点 |
二抗聚集或有沉淀 |
稀释后的二抗工作液用滤膜过滤处理 |
非特异性条带 |
HRP过多 |
稀释HRP-二抗至合适浓度 |
抗体特异性不好 |
更换一抗 |
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SDS导致非特异性结合 |
规范转膜操作 |