Western 膜再生液(酸性)说明书(Ver01)

Stripping Buffer

Western 膜再生液(酸性)

Description 产品描述：

允许对同一张膜进行多次Western Blot 检测。在室温条件下，将用过的膜浸泡在膜再生液5-15分钟，可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后，可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot 实验，因而可利用同一张膜进行多次蛋白检测。适宜从少量样品多次检测多种不同蛋白质。即使样品量并不匮乏，采用这一策略多次检测同一张膜上的蛋白，能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。

Storage and stability 存储及效期：

室温避光干燥密封保存，有效期至少1年。

重要提醒：

1.                      需自备盖玻片与载玻片。

2.                      封片液在温度较低时呈固态，使用前须在37-50℃温育，并在完全溶解后使用。

3.                      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4.                      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品等用途。

试剂盒组成：

Preparation使用说明：

1.       在完成Western化学发光检测后，将膜至于蒸馏水中漂洗5分钟。

2.       弃蒸馏水，加入适量的Stripping buffer（酸性），至少需把膜完全覆盖。在摇床上漂洗5-10分钟。

3.       弃Stripping buffer（酸性）并吸尽残余液体。加入PBS或TBST漂洗3-4次，每次在摇床上漂洗3-5分钟。

4.       进行封闭(blocking)等Western的后续操作。

说明：

1．膜再生或Stripping 的实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下，将与抗原分子结合的一抗和二抗洗脱下来。有许多因素影响抗体从膜洗脱，如膜类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性。按下面的说明优化再生液中孵育膜的时间至关重要。

2．确定膜上抗体是否去除与优化再生液孵育膜的时间：用ECL 荧光工作液孵育再生后的膜约1分钟，然后进行X 光胶片曝光并显影，可确定膜上的抗体是否完全去除。如胶片上显示条带，表明抗体未完全去除，应继续将膜浸泡在再生液中另外孵育30-60 分钟。然后再次ECL 检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间。

3．尽量避免使用干燥保存的膜，干的膜上的抗体很难被Strip 干净。